Estandarización de PCR múltiple en tiempo real para el diagnóstico de sida y leucemia en Felis silvestris catus / Standardization of Multiplex Real-Time PCR for the diagnosis of Feline Immunodeficiency Virus (FIV) and Feline Leukemia Virus (FeLV) in Felis silvestris catus / Padronização da PCR múltipla em tempo real para o diagnóstico de AIDS e leucemia em Felis silvestris catus

Resumen Las enfermedades producidas por virus como sida y leucemia son altamente prevalentes en felinos domésticos, debido a su facilidad de transmisión, presentan signos clínicos similares a otras infecciones que pueden generar dificultades en el diagnóstico, por lo tanto, se deben analizar mediante pruebas de laboratorio; los exámenes disponibles en la actualidad presentan algunas desventajas, por ello se estandarizó una PCR múltiple en tiempo real con sondas Taqman que fue diseñada para detección de infección con el virus de inmunodeficiencia felina (VIF), el virus de leucemia felina (VLFe) o mixtas. Se calculó la sensibilidad (0,53/0,26) y la especificidad (0,46/0,74) para leucemia y sida respectivamente con la metodología de Broemeling que considera que la prueba de referencia contra la cual se compara no es un referente verdadero (Gold standard), según estos resultados se concluye que es necesario aumentar el tamaño de muestra; sin embargo, la PCR múltiple es una metodología muy sensible, fue validada de forma In silico y presentó resultados congruentes al realizarla in vivo.

Abstract Diseases such as Feline Immunodeficiency Virus (VIF) and Feline Leukemia Virus (VLFe) are highly prevalent in domestic cats, due to their ease of transmission. Clinical signs are similar to other infections causing difficulties in diagnosis, therefore, they should be analyzed by laboratory tests; Currently available tests have some disadvantages, a multiplex real-time PCR was standardized with Taqman probes, designed for detection of infection with VIF, VLFe or both. Sensitivity (0.53/0.26) and specificity (0.46/0.74) for VLFe and VIF respectively, were calculated with Broemeling's methodology, which considers that the reference test against which it is compared is not a Gold standard, according to these results it is necessary to increase the sample size; However, multiplex PCR is a very sensitive methodology, it was validated In silico form and presented congruent results when performed in vivo.

Resumo Doenças causadas por vírus como AIDS e leucemia são altamente prevalentes em gatos domésticos, devido a sua facilidade de transmissão com sinais clínicos semelhantes a outras infecções que podem causar dificuldades no diagnóstico, portanto devem ser analisados ​​por exames laboratoriais; Os testes atualmente disponíveis têm algumas desvantagens, portanto uma PCR em tempo real múltipla foi padronizada com sondas Taqman para a detecção de infecção pelo vírus da imunodeficiência felina (FIV), vírus da leucemia felina (VLFe) ou misto . A sensibilidade (0,53 /0,26) e a especificidade (0,46/0,74) para leucemia e AIDS foram calculadas, respectivamente, com a metodologia de Broemeling, que considera que o teste de referência com o qual é comparado não é um referência verdadeira (teste de ouro), de acordo com esses resultados, conclui-se que é necessário aumentar o tamanho da amostra, entretanto, a PCR múltipla é uma metodologia muito sensível, foi validada na forma silico e apresentou resultados congruentes quando realizada in vivo.

Aspectos anatomopatológicos e avaliação de agentes infecciosos em 32 gatos com colângio-hepatite / Anatomopathological aspects and determination of infectious agents in 32 cats with cholangiohepatitis

A colângio-hepatite é considerada uma causa frequente de insuficiência hepática em gatos e é classificada em neutrofílica, linfocítica e esclerosante. Os objetivos deste estudo foram determinar a frequência de colângio-hepatite em gatos diagnosticados na Região Metropolitana de Porto Alegre, descrever seus aspectos anatomopatológicos e estabelecer uma associação com as infecções por Escherichia coli, vírus da imunodeficiência felina (FIV) e vírus da leucemia felina (FeLV). No período de janeiro de 2000 a julho de 2016 o Setor de Patologia Veterinária da Universidade Federal do Rio Grande do Sul realizou 1915 necropsias de gatos, destes, 32 foram diagnosticados com colângio-hepatite, representando 1,7% dos casos. Destes, a colângio-hepatite linfocítica (CHL) foi diagnosticada em 68,7% (22/32), a neutrofílica (CHN) em 21,9% (7/32) e a esclerosante (CHE) com 9,4% (3/32). A idade variou de quatro meses a 16 anos, com a mediana de seis anos, acometendo predominantemente gatos sem raça definida. Somente na CHN observou-se predisposição por machos, verificado em 85,7% (6/7) dos casos. Enterite e pancreatite foram identificadas concomitantemente com a colângio-hepatite em 56,2% (18/32) dos casos, cada, e a formação de tríade foi identificada em 46,9% (15/32) dos gatos. Através da imuno-histoquímica, 68,2% (15/22) dos gatos com CHL, foram positivos para FIV, 40,9% (9/22) para FeLV e 31,8% (7/22) marcação para ambos os retrovírus. Na CHN, 85,7% (6/7) positivos para FIV, 57,1% (4/7) para FeLV e 42,8% (3/7) imunorreação para os dois retrovírus. Na CHE, 100% (3/3) dos casos apresentaram marcação para FeLV, 33,3% (1/3) para FIV e 33,3% (1/3) para ambos. Imunomarcação para E. coli foi observada em 27,3% (6/22) dos casos da CHL, 28,6% (2/7) da CHN e em 33,3% (1/3) da CHE. E. coli, Enterococcus sp. e Klebsiella pneumoniae foram os micro-organismos mais frequentes isolados no exame bacteriológico. A visualização da E. coli, através da IHQ no sistema hepatobiliar de gatos diagnosticados com colângio-hepatite associados à inflamação, sugere que a doença se desenvolveu secundariamente à infecção bacteriana ascendente.(AU)

Cholangiohepatitis is considered a frequent cause of liver failure in cats, and are classified as neutrophilic, lymphocytic and sclerosing. The aims of this study was to determine the frequency of cholangiohepatitis in cats diagnosed in the metropolitan region of Porto Alegre, to describe the anatomopathological aspects and to establish an association with Escherichia coli, feline immunodeficiency virus (FIV) and feline leukemia virus (FeLV). From January 2000 to July 2016, the Department of Veterinary Pathology of the Universidade Federal do Rio Grande do Sul performed 1915 cat necropsies, of which 32 were diagnosed with cholangiohepatitis, representing 1.7% of the cases. Of these, lymphocytic cholangiohepatitis (LCH) was diagnosed in 68.7% (22/32), neutrophilic (NCH) in 21.9% (7/v) and sclerosing cholangiohepatitis (SCH) with 9.4% (3/32) of the cases. In general, age ranged from four months to 16 years, with the median age of six years, and predominantly affected cats with mixed breed. Only in NCH demonstrated male predisposition, verified in 85.7% (6/7) of this cases. Enteritis and pancreatitis were identified concomitantly with cholangiohepatitis in 56.2% (18/32) cases, each, and triad formation was identified in 46.9% (15/32) of cats. In the immunohistochemistry, we observed that 68.2% (15/22) of the cats with LCH were positive for FIV, 40.9% (9/22) for FeLV, and 31.8% (7/22) positive for both retroviruses. In NCH, 85.7% (6/7) was positive for FIV, 57.1% (4/7) for FeLV, and 42.8% (3/7) immunoreactions for the two retroviruses. In SCH, 100% (3/3) of the cases presented FeLV marking, 33.3% (1/3) for FIV and 33.3% (1/3) for both. Immunostaining for E. coli was observed in 27.3% (6/22) of LCH, 28.6% (2/7) of NCH, and 33.3% (1/3) of SCH. E. coli, Enterococcus sp. and Klebsiella pneumoniae were the most frequently microorganisms isolated in the bacteriological examination. The visualization of E. coli by the immunohistochemistry in the hepatobiliary system of cats diagnosed with cholangiohepatitis suggests that the disease developed secondary to ascending bacterial infection.(AU)

Criterios diagnósticos para la infección por el virus de la inmunodeficiencia felina y el virus de la leucemia felina en gatos domésticos de Buenos Aires, Argentina / Viral diagnostic criteria for Feline immunodeficiency virus and Feline leukemia virus infections in domestic cats from Buenos Aires, Argentina

A cross-sectional study was carried out on cats attending the Small Animal Hospital at the Faculty of Veterinary Sciences of the University of Buenos Aires to assess the prevalence and associated risk factors of Feline immunodeficiency virus (FIV) and Feline leukemia virus (FeLV) in the city of Buenos Aires, Argentina. Blood samples from 255 cats with symptoms compatible with FIV or FeLV infection, collected between 2009 and 2013 were analyzed by serology (immunochromatography, IA) and by hemi-nested PCR (n-PCR). The IA and n-PCR assays showed similar percentages of positivity for FIV while the n-PCR test was more sensitive for FeLV. Differences between the diagnostic tests and their choice according to the age of the animal are discussed. The clinical histories of ninety of the 255 cats showed blood profiles similar to others previously reported and revealed a higher risk of infection in male adult cats with outdoor access.

Para determinar la prevalencia en la ciudad de Buenos Aires del virus de la inmunodeficiencia felina (FIV) y del virus de la leucemia felina (FeLV), y analizar los factores de riesgo que pudieran estar asociados a ellos, se realizó un estudio transversal en gatos atendidos en el Hospital de Pequeños Animales de la Facultad de Ciencias Veterinarias de la Universidad de Buenos Aires. Se analizaron por serología (inmunocromatografía --#91;IA--#93;) y por hemi-nested PCR (n-PCR) 255 muestras de sangre de gatos con síntomas compatibles con infección por FIV o FeLV. La IA y la n-PCR revelaron porcentajes similares de animales positivos para FIV, mientras que para FeLV el diagnóstico por n-PCR resultó más sensible. Se discuten las diferencias halladas entre los métodos diagnósticos y su elección según la edad del animal. Las historias clínicas de 90 de los 255 gatos mostraron perfiles sanguíneos similares a otros ya reportados y revelaron el mayor riesgo de infección con ambos virus en machos adultos con acceso al exterior.

Ocorrência do subtipo B do vírus da imunodeficiência felina em gatos domésticos da região sul do estado do Rio Grande do Sul, Brasil / Occurrence of subtype B of the feline immunodeficiency virus in domestic cats from the south region of Rio Grande do Sul state, Brazil

No Brasil existem poucos estudos sobre a ocorrência da infecção pelo vírus da imunodeficiência felina (FIV), assim como a determinação dos subtipos circulantes, o que é indispensável para o desenvolvimento de vacinas e novos testes diagnósticos. O presente trabalho investigou a ocorrência da infecção pelo FIV entre os anos de 2010 e 2011 em gatos domésticos submetidos a atendimento clínico na cidade de Pelotas e região. Amostras de sangue total de 70 animais, incluindo suspeitos (28) ou não suspeitos (42) da infecção pelo FIV, foram submetidas à reação de PCR nested. Os resultados indicaram uma frequência de infecção de 15,7% (11/70) e a análise dos fatores associados (sexo, idade e condição clínica) evidenciou uma maior ocorrência em gatos com idade superior a 10 anos e acometidos por infecções crônicas e recidivantes. Oito amostras positivas na PCR nested foram submetidas a sequenciamento genômico e somente o subtipo B foi detectado na região estudada.

In Brazil there are few studies on the occurrence of the feline immunodeficiency virus (FIV) infection and its subtypes, which are essential for the development of vaccines and new diagnostic tests. The present study investigated the occurrence of the FIV infection between 2010 and 2011 in domestic cats submitted to medical attendance in the city of Pelotas and nearby area. Total blood samples of seventy cats, suspected (28) or not (42) of infection by FIV were analyzed by nested PCR in order to perform a diagnosis. The results pointed to a FIV infection frequency of 15.7% (11/70) and the analysis of the risk factors related to infection (sex, age and clinical condition) evidenced a greater occurrence in cats up to 10 years of age with chronic and recurrent infections. Eight samples found positive by nested PCR were submitted to DNA sequencing indicating that only the subtype B was detected in the studied region.

Azidothymidine and recombinant human interferon-alpha therapy in a cat with feline immunodeficiency virus / 동물의과학연구지

A 7-year-old, spayed female, domestic short hair cat showed signs of a 2-week history of chronic anorexia, depression, and severe weight loss. Upon physical examination, pyrexia, mild gingivitis, and pale mucus membranes were noted. Laboratory analysis revealed normocytic normochromic non-regenerative anemia, severe thrombocytopenia, and hypergammaglobulinemia. Serum protein electrophoresis revealed the presence of elevated alpha-2 fraction within the globulin concentration. Based on history, clinical signs, and laboratory results, systemic viral infection was strongly suspected. Reverse transcriptase polymerase chain reaction identified the presence of feline immunodeficiency virus (FIV) in the serum. Furthermore, gene sequencing revealed the virus as FIV subtype A. Treatment with anti-retroviral agents, including azidothymidine (AZT) and recombinant human interferon-alpha, was continued for 4 weeks. However, the patient's clinical condition deteriorated, resulting in death 1 month after initiation of treatment due to progressive renal failure. Necropsy and histopathology revealed hepatic and renal necrosis with hyper-cellular bone marrow mainly comprised of myeloid precursor cells. This case report is the first to describe phylogenetic subtyping, anti-retroviral combination treatment, and clinical outcomes in an FIV-infected cat in Korea. In addition, this report suggests that treatment should be initiated during the early phase of infection that could be effective for the virus.

Evaluation of a recombinant p24 antigen for the detection of feline immunodeficiency virus-specific antibodies / Avaliação do antígeno recombinante p24 para a detecção de anticorpos específicos do vírus da imunodeficiência felina

Feline Immunodeficiency Virus is a worldwide infection and is considered a significant pathogen. The diagnosis of FIV infections is mainly based on commercially available rapid tests that are highly expensive in Brazil, hence it is rarely performed in the country. Furthermore, lentiviruses grow slowly and poorly in tissue cultures, making the production of viral antigen by classic means and thus the establishment of FIV immunodiagnosis impracticable. In order to deal with this, recombinant DNA techniques were adopted to produce the protein p24, a viral capsid antigen. The protein's reactivity evaluation analyzed by Western blot indicated that this recombinant antigen can be a useful tool for the immunodiagnostic of FIV infections.

O vírus da imunodeficiência felina tem distribuição mundial e é considerado um patógeno significativo. No Brasil, a prática diagnóstica é baseada principalmente em teste rápidos, importados e de custo elevado, disponíveis comercialmente. Devido ao seu custo proibitivo em nosso país, o diagnóstico da infecção pelo FIV é raramente realizado. Ademais, os lentivírus se multiplicam lenta e pobremente em cultura de células, o que torna a produção de antígeno por meios clássicos e o estabelecimento do imunodiagnóstico impraticável. Com o objetivo de lidar com esta questão, técnicas de DNA recombinante foram utilizadas para produção de um antígeno do capsídeo viral, a proteína p24. A avaliação da reatividade realizada por Western blot indicou que este antígeno recombinante pode ser útil para o imunodiagnóstico de infecções pelo FIV.

Occurrence of feline immunodeficiency virus infection in cats / Ocorrência da infecção pelo vírus da imunodeficiência felina em gatos

The occurrence of feline immunodeficiency virus (FIV) in Brazil has been previously described. This study aimed to investigate the frequency of FIV infection in 454 blood samples from healthy and sick domestic cats from 13 cities of São Paulo State, Brazil as well as to evaluate the risk factors associated with the infection. The results showed that 14.7 percent (67/454) of the cats were infected with FIV. The clinical evaluation showed that 29.2 percent of the FIV-positive animals were sick, while 7.3 percent did not show any type of clinical manifestation. In addition, the vast majority (23.1 percent) of positive cases corresponded to free-roaming owned cats. The incidence of FIV infection was higher in males (20.3 percent) than in females (9.7 percent). The results suggest that certain characteristics such as gender, health status and lifestyle may be associated with the risk of being infected with FIV in the population of cats studied.

No Brasil, a ocorrência da infecção pelo vírus da imunodeficiência felina (FIV) já foi descrita. Neste estudo, objetivou-se investigar a freqüência da infecção pelo FIV em 454 amostras de sangue de gatos domésticos doentes e sadios, oriundos de 13 cidades do Estado de São Paulo, assim como avaliar os fatores de risco associados à infecção pelo FIV. Os resultados demonstraram que 14,7 por cento (67/454) dos gatos estavam infectados pelo FIV. A avaliação clínica dos animais investigados mostrou que 29,2 por cento dos animais soropositivos para FIV estavam doentes, enquanto 7,3 por cento não apresentavam nenhuma manifestação clínica. Além disso, a vasta maioria dos animais positivos (23,1 por cento) vivia em residências e tinha livre acesso à rua. A incidência da infecção pelo FIV foi maior nos gatos machos (20,3 por cento) do que nas fêmeas (9,7 por cento). Os resultados sugerem que certas características como sexo, estilo de vida e estado de saúde podem estar associadas ao risco de contrair a infecção pelo FIV na população de gatos estudada.

Ocorrência do vírus da imunodeficiência felina e do vírus da leucemia felina em gatos domésticos mantidos em abrigos no município de Belo Horizonte / Occurrence of feline immunodeficiency virus and feline leukemia virus in Sheltered domestic cats of Belo Horizonte

Investigou-se a ocorrência da infecção pelo vírus da imunodeficiência felina (FIV) e pelo vírus da leucemia felina (FeLV) em gatos domésticos, provenientes de dois abrigos, no município de Belo Horizonte. Amostras de sangue de 145 animais foram coletadas e testadas para detecção do FIV pela reação em cadeia da polimerase (PCR). Destas amostras, 40 foram testadas para o antígeno p26 de FeLV por meio de ELISA. Observaram-se duas fêmeas (1,4 por cento) e quatro machos (2,8 por cento) positivos para FIV e nove fêmeas (22,5 por cento) e quatro machos (10,0 por cento) positivos para FeLV

The occurrence of the feline immunodeficiency virus (FIV) and feline leukemia virus (FeLV) was investigated in domestic cats from two shelters of Belo Horizonte. Samples from 145 cats were collected and tested for FIV by the polymerase chain reaction (PCR). Forty out of 145 samples were tested for FeLV p27 antigen by a commercial ELISA kit. Two females (1.4 percent) and four males (2.8 percent) were positive for FIV. For FeLV tests, 13 cats (32.5 percent) were positive, being nine females (22.5 percent) and four males (10.0 percent)